實(shí)驗(yàn)室臺(tái)式離心機(jī)常用的離心方法大致分為以下三種:
1.差速離心法。采用不同的離心速度和離心時(shí)間,使沉降速度不同的顆粒分步離心的方法,稱為差速離心。操作時(shí),將含有兩種不同顆粒的混懸液,以常速離心,使大的顆粒下沉,將上清液傾倒于另一離心管中,再加大離心力,離心一定時(shí)間,分離小的顆粒,反復(fù)多次分離,達(dá)到分離目的。差速離心主要用于分離大小和密度差異較大的顆粒。差速離心法的優(yōu)點(diǎn)是:操作簡單,離心后用傾倒法即可將上清液與沉淀分開,并可使用容量較大的角式轉(zhuǎn)子。
2.密度梯度離心法。該法又分為速率區(qū)帶離心法和等密度區(qū)帶離心法。樣品在一定惰性梯度介質(zhì)中進(jìn)行離心沉淀或沉降平衡,在一定離心力下把顆粒分配到梯度液中某些特定位置上,形成不同區(qū)帶的分離方法。這種離心方法的優(yōu)點(diǎn)是:具有很好的分辨率,分離效果好,可一次獲得較純顆粒;適用范圍廣,既能分離沉淀系數(shù)差的顆粒,又能分離有一定浮力密度的顆粒;顆粒不會(huì)積壓變形,能保持顆?;钚?,并防止已形成的區(qū)帶由于對流而引起混合。被離心的物質(zhì)根據(jù)其沉降系數(shù)不同進(jìn)行分離,同類物質(zhì)則因分子大的沉降速度快于分子小的物質(zhì)從而得到分離。密度梯度的制備可采用梯混合器,也可將不同濃度的蔗糖溶液,小心地一層層加入離心管中,越靠管底,濃度越高,形成階梯梯度。在密度梯度離心過程中,區(qū)帶的位置和寬度隨離心時(shí)間的不同而改變。隨離心時(shí)間的加長,區(qū)帶會(huì)因顆粒擴(kuò)散而越來越寬。
3.臺(tái)式高速離心機(jī)GT10-1分析性超速離心法。分析型超速離心機(jī)主要由一個(gè)橢圓形的轉(zhuǎn)子、一套真空系統(tǒng)和一套光學(xué)系統(tǒng)所組成。該轉(zhuǎn)子通過一個(gè)柔性的軸連接成一個(gè)高速的驅(qū)動(dòng)裝置,此軸可使轉(zhuǎn)子在旋轉(zhuǎn)時(shí)形成自己的軸。轉(zhuǎn)子在一個(gè)冷凍的真空腔中旋轉(zhuǎn),其容納兩個(gè)小室:分析室和配衡室。分析室的容量一般為1mL,呈扇形排列在轉(zhuǎn)子中,其工作原理與一個(gè)普通水平轉(zhuǎn)子相同。分析室有上下兩個(gè)平面的石英窗,離心機(jī)中裝有的光學(xué)系統(tǒng)可保證在整個(gè)離心期間都能觀察小室中正在沉降的物質(zhì),可以通過對紫外光的吸收或折射率的不同對沉降物進(jìn)行監(jiān)測。
臺(tái)式醫(yī)用離心機(jī)是離心機(jī)中zui簡單而廉價(jià)的,常用來壓緊或收集小量快速沉降的物質(zhì)(例如紅細(xì)胞)。大多數(shù)臺(tái)式醫(yī)用離心機(jī)的zui大速度不超過5000rpm,并且都在室溫中運(yùn)轉(zhuǎn),所以在操作使用中應(yīng)注意以下方面:
1.將待離心的液體置于離心管中,盛有離心液的兩支離心管分別放入離心套管中(如離心液只夠盛于一支離心管中,另一支管心管中裝普通水),在托盤天平上通過向套管中加水調(diào)節(jié)兩邊重量使之達(dá)到平衡。
2.已平衡的離心管連同套管一起,對稱放入旋轉(zhuǎn)臺(tái)的兩個(gè)插孔中。蓋上蓋,打開電源開關(guān),調(diào)節(jié)旋鈕逐步加擋到所要求的轉(zhuǎn)速,開始計(jì)算離心時(shí)間。
3.到達(dá)所需要離心時(shí)間后,再調(diào)旋鈕進(jìn)行減速。待離心機(jī)自然停止轉(zhuǎn)動(dòng)后取出離心管。
4.臺(tái)式離心機(jī)DT5-2離心完畢之后要拔掉電源插頭,清洗離心管及套管,將離心機(jī)及天平等歸還原處。